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“做miRNA下調，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經膠質瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。

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