在現(xiàn)代分子生物學研究中,聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)已成為不可或缺的工具,廣泛應(yīng)用于基因擴增、突變檢測、基因表達分析等多個領(lǐng)域。而一款PCR Master Mix則是確保實驗成功的關(guān)鍵因素之一。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye)憑借其性能和獨特的產(chǎn)品特點,為科研工作者提供了高效、可靠的實驗解決方案。一、酶性能Phusion Master Mix的成分是Phusion DNA聚合酶,這是一種具有高保真性的熱穩(wěn)定酶。它能夠以極高的準確性復制DNA模板,錯誤率極低,為普通Taq酶的1/500,這使得它在擴增長片段DNA或?qū)π蛄袦蚀_性要求極高的實驗中表現(xiàn)出色。例如,在進行基因克隆或構(gòu)建基因文庫時,Phusion酶能夠確保擴增產(chǎn)物的序列與原始模板高度一致,從而提高了后續(xù)實驗的成功率。二、快速擴增能力盡管Phusion酶具有高保真性,但其擴增速度并未受到影響。它能夠在短時間內(nèi)完成長片段DNA的擴增,提高了實驗效率。對于長度在5kb以內(nèi)的DNA片段,Phusion Master Mix可以在幾分鐘內(nèi)完成擴增,這對于需要快速獲得實驗結(jié)果的研究人員來說是一個巨大的優(yōu)勢。例如,在進行高通量基因篩查或大規(guī)模樣本分析時,Phusion Master Mix能夠縮短實驗周期,提高工作效率。Pfu DNA Polymerase的熱穩(wěn)定性:Pfu DNA Polymerase在高溫下仍保持活性,適合高溫PCR反應(yīng)。Recombinant Human ENPP-2/Autotaxin Protein,His Tag
Probe qPCR Mix (2×, Low ROX):高特異性與低背景校正的qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, Low ROX) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計的即用型預混液,適用于需要低濃度ROX校正染料的qPCR儀器。該預混液結(jié)合了熱啟動Taq DNA聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及低濃度ROX,能夠?qū)崿F(xiàn)高效、特異的基因定量檢測。產(chǎn)品特點高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。低濃度ROX校正:適用于需要低濃度ROX作為校正染料的qPCR儀器,如ABI 7500、ViiA 7、QuantStudio系列等。防污染系統(tǒng):部分產(chǎn)品含有dUTP和UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能夠有效降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止假陽性。快速反應(yīng):支持快速qPCR程序,可在短時間內(nèi)完成檢測,提高實驗效率。操作簡便:2×預混液設(shè)計,只需加入引物、探針和模板即可進行反應(yīng),減少了操作步驟和污染風險。應(yīng)用場景基因表達分析:用于定量檢測特定基因的表達水平。病原體檢測:快速檢測病毒、細菌等病原體的DNA。SNP分型和拷貝數(shù)變異分析:通過探針法實現(xiàn)高特異性的基因分型。多重qPCR:可在同一反應(yīng)中同時檢測多個目標基因。Recombinant Human TREML2/TLT-2 Protein,His Tag在基因編輯過程中,Pfu DNA Polymerase 可用于合成高質(zhì)量的單鏈或雙鏈DNA修復模板。
產(chǎn)品特點高靈敏度與特異性SYBRGreen是一種熒光染料,能夠特異性地結(jié)合到雙鏈DNA的小溝區(qū)域。在qPCR過程中,隨著DNA鏈的延伸,SYBRGreen的熒光信號不斷增強,從而實現(xiàn)對目標基因的實時定量。這種染料的結(jié)合特異性極高,確保了實驗結(jié)果的準確性。即使在低濃度的模板條件下,也能檢測到目標基因的存在,靈敏度可達單拷貝水平。2×預混體系,操作簡便該產(chǎn)品采用2×預混體系,預先將Taq酶、dNTPs、MgCl?等關(guān)鍵組分混合均勻,實驗人員需加入引物和模板即可進行反應(yīng)。這種預混體系簡化了實驗操作步驟,減少了人為誤差,同時保證了反應(yīng)體系的均一性和穩(wěn)定性。無論是初學者還是經(jīng)驗豐富的研究人員,都能輕松上手,快速開展實驗。低ROX參比染料,減少背景干擾ROX染料作為qPCR反應(yīng)中的參比染料,用于校正孔間熒光信號的差異。然而,過高的ROX濃度可能會引入背景熒光,影響實驗結(jié)果的準確性。SYBRGreenqPCRMix(2×,LowROX)采用了低濃度的ROX染料,有效降低了背景干擾,提高了熒光信號的信噪比,使得定量結(jié)果更加精確可靠。
SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus):助力高精度定量PCR實驗實時熒光定量PCR(qPCR)是分子生物學中一種重要的技術(shù),廣泛應(yīng)用于基因表達分析、病原體檢測和基因分型等領(lǐng)域。SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種專為qPCR設(shè)計的高性能預混液,憑借其獨特的配方和優(yōu)化的組分,為科研人員提供了一種高效、靈敏且防污染的解決方案。產(chǎn)品特點SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus) 的優(yōu)勢在于其優(yōu)化的配方和防污染體系。產(chǎn)品采用2×濃縮配方,包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液、SYBR Green I熒光染料以及UDG酶等關(guān)鍵組分。其中,UDG酶(尿嘧啶-DNA糖基化酶)和dUTP的加入,能夠有效降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,從而防止前次反應(yīng)的殘余產(chǎn)物對后續(xù)實驗的污染,顯著提高了實驗結(jié)果的準確性和可靠性。此外,該產(chǎn)品還采用了抗體修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶,能夠在預變性步驟中釋放酶活性,有效避免引物二聚體和非特異性擴增的發(fā)生,進一步提升了擴增的特異性和靈敏度。在分子生物學研究中,PCR技術(shù)是基因擴增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×)則是實現(xiàn)高保真擴增的理想選擇。
Taq DNA聚合酶:分子生物學的“明星酶”Taq DNA聚合酶是一種從嗜熱菌Thermus aquaticus中分離得到的耐熱性DNA聚合酶,因其獨特的耐高溫特性和高效的DNA合成能力,成為分子生物學領(lǐng)域不可或缺的工具。該酶在PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))技術(shù)中發(fā)揮著重要作用,極大地推動了基因擴增、測序和診斷技術(shù)的發(fā)展。Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,但缺乏3'→5'外切酶活性,這使得它在DNA合成過程中能夠快速延伸引物,同時在PCR產(chǎn)物的3'端添加一個突出的A堿基,便于后續(xù)的克隆操作。此外,Taq酶的耐熱性使其能夠在PCR的高溫變性步驟中保持穩(wěn)定,從而實現(xiàn)高效的循環(huán)擴增。近年來,科學家們通過對Taq DNA聚合酶的改造和優(yōu)化,開發(fā)出多種突變體,以滿足不同的實驗需求。例如,Klentaq1突變體具有更高的耐熱性和保真性,適用于長片段PCR擴增。此外,Taq酶的5'外切酶活性還被用于開發(fā)新型的多重PCR檢測技術(shù),如“MeltArray”技術(shù),實現(xiàn)了在單次反應(yīng)中檢測多個靶點。Taq DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用不僅極大地簡化了DNA擴增的流程,還為基因診斷、遺傳病檢測和個性化醫(yī)療等領(lǐng)域提供了強大的技術(shù)支持。盡管Ultra-Long Master Mix設(shè)計用于長片段擴增,但在某些情況下,可能出現(xiàn)非特異性擴增,需要通過優(yōu)化引物。Recombinant Human PD-1/PDCD1 Protein,hFc Tag
通過在常溫下抑制Taq酶活性,該預混液有效避免了非特異性擴增形成,從而提高了PCR反應(yīng)的特異性。Recombinant Human ENPP-2/Autotaxin Protein,His Tag
Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (5U/μl):高效去除尿嘧啶的分子生物學工具Uracil-DNA Glycosylase(UDG)是一種來源于大腸桿菌的重組酶,能夠高效催化DNA鏈中尿嘧啶(dU)堿基與脫氧核糖骨架之間的N-糖苷鍵水解,釋放游離尿嘧啶。這種酶對單鏈和雙鏈DNA均有效,但對RNA或短于6個堿基的DNA寡核苷酸無活性。產(chǎn)品特點UDG酶的主要特點是能夠在PCR反應(yīng)中有效防止產(chǎn)物污染。通過在PCR反應(yīng)中摻入dUTP替代dTTP,生成含有dU的DNA產(chǎn)物,UDG可以特異性降解這些含dU的DNA,從而避免PCR產(chǎn)物的交叉污染。此外,UDG酶在較寬的pH范圍內(nèi)具有活性,適pH為8.0,且不需要二價陽離子。應(yīng)用場景UDG酶廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域:PCR產(chǎn)物防污染:通過降解含dU的PCR產(chǎn)物,防止氣溶膠污染導致的假陽性結(jié)果。單核苷酸多態(tài)性檢測:用于檢測基因組中的單核苷酸變異?;蚓庉嬇c位點特異性突變:用于制備和處理含有dU的DNA模板。蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究:通過去除尿嘧啶,研究DNA修復機制。在PCR反應(yīng)中,UDG酶的推薦使用濃度為0.01U/μl,通常在反應(yīng)體系中加入適量的UDG Buffer以確保比較好活性。此外,UDG酶在RT-PCR中需謹慎使用,因為其可能消化新合成的cDNA。Recombinant Human ENPP-2/Autotaxin Protein,His Tag